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摘要
目的 制备抗猪流行性腹泻病毒的单克隆抗体。方法 本研究以哺乳动物细胞293T表达的PEDV S1重组蛋白免疫BALB/c小鼠；利用细胞融合技术，经间接ELISA方法筛选和细胞克隆，得到5株能稳定分泌抗PEDV S1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。筛选效价最高的杂交次瘤细胞株制备单克隆抗体并进行特性鉴定。结果 免疫小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞融合后，经多次克隆及亚克隆筛选，共得到5株能与PEDV S1蛋白产生特异性反应的单抗表达细胞株。分别命名为：12D14H4、13F5B9、10D2B10、11A7C9和14E6F5，其分泌的抗体效价分别为：1∶51 200、1∶25 600、1∶12800、1∶12 800、1∶3 200。5株单抗与PEDV S1蛋白反应后，均在130 KDa附近出现清晰条带。所得单克隆抗体为IgGⅠ亚型，轻链为κ链；杂交瘤细胞用无血清培养基培养，上清中抗体效价最高可达到1∶1 024 000，且经连续传代20代效价没有显著降低。Western blot及间接免疫染色检测结果显示，单克隆抗体能识别PEDV S1蛋白，并与Vero细胞、PPRV、PRRSV、PCV2、PP和CSFV等均无交叉反应，具有良好的特异性，可用于PEDV感染检测。结论 PEDV单克隆抗体的成功研制，为PEDV免疫诊断、表位识别及蛋白研究奠定了良好基础。
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