鸭瘟病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法的建立

作者：万春和; 刘荣昌; 陈翠腾; 程龙飞; 施少华; 傅光华; 陈红梅; 傅秋玲; 黄瑜^*

来源：福建农林大学学报（自然科学版）, 2018, 47(06): 722-728.

DOI：10.13323/j.cnki.j.fafu(nat.sci.).2018.06.014

• 鸭瘟病毒
• gE基因
• TaqMan探针
• 实时荧光定量PCR方法

根据鸭瘟病毒(DEV) gE基因的特征,设计特异性引物和探针,经条件优化后,建立检测DEV的TaqMan实时荧光定量PCR方法.结果表明:当gE基因含量为1.0×101～1.0×106拷贝·μL-1时,建立的实时荧光定量PCR检测方法有良好的线性扩增,其标准曲线方程为:y=-3.480x+37.955,扩增相关系数为0.999;敏感性强,最低检测限为10拷贝·μL-1;特异性好,仅对DEV强毒株和弱毒活疫苗株检测到阳性扩增信号,对鸭源其他传染病病原(番鸭细小病毒、鹅细小病毒、鸭腺病毒A型、鸭甲肝病毒1型、鸭甲肝病毒3型、番鸭呼肠孤病毒、新型鸭呼肠孤病毒、H9N2亚型禽流感病毒、禽1型副粘病毒、鸭源大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌、鸭源禽多杀性巴氏杆菌)检测均为阴性;重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为0.62%～1.14%和0.69%～2.40%.对临床送检疑似DEV感染的14份样品进行检测,并与常规PCR方法、病毒分离鉴定进行比较,阳性率分别为85.71%(12/14)、71.43%(10/14)和57.14%(8/14);且与常规PCR方法、病毒分离鉴定的阳性符合率均为100%.本试验建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法,可用于开发DEV快速诊断试剂盒,用于开展DEV流行病学调查.

• 单位
  福建省禽病防治重点实验室; 福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心; 福建省农业科学院