短发夹RNA靶向沉默大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞胰岛素样生长因子结合蛋白-3的研究

作者：蒲小勇; 周香雪; 肖恒军; 林楚琪; 彭伟华; 毕学成; 李东; 刘久敏

来源：中华实验外科杂志, 2017, 34(08): 1367-1370.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2017.08.033

• 勃起功能障碍
• 胰岛素样生长因子结合蛋白-3
• 基因治疗
• RNA干扰技术
• 大鼠

目的筛选靶向抑制大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMC)中胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)基因表达最有效的短发夹RNA(shRNA),为基因沉默IGFBP-3治疗大鼠勃起功能障碍提供依据。方法构建4对靶向IGFBP-3的短发夹RNA(shRNA)质粒和阴性对照,体外原代培养CCSMC,分6组:空白对照组、转染pGPU6/GFP/Neo-IGFBP-3(611)组、转染pGPU6/GFP/Neo-shIGFBP-3(526)组、转染pGPU6/GFP/Neo-shIGFBP-3(866)组、转染pGPU6/GFP/Neo-shIGFBP-3(710)组和转染pGPU6/GFP/Neo-shNC阴性对照组;转染48 h后各组分别用实时定量聚合酶链反应(PCR)和Western blot方法检测靶向沉默IGFBP-3的效果。结果 CCSMC转染后实时定量PCR和Western blot检测发现,pGPU6/GFP/Neo-shIGFBP3-526、pGPU6/GFP/Neo-shIGFBP3-611、pGPU6/GFP/Neo-shIGFBP3-866均有明显的沉默效果,与空白对照组和转染pGPU6/GFP/Neo-shNC组比较差异有统计学意义,而其中pGPU6/GFP/Neo-shIGFBP3-526沉默效果最明显,实时定量PCR和Western blot结果显示分别可以抑制72%和79%。结论靶向IGFBP-3基因的shRNA能够高效抑制大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞中靶基因的表达,为进一步体内实验奠定基础。

• 单位
  中山大学附属第三医院; 广东省医学科学院; 神经内科; 广东省人民医院; 中山大学附属第一医院