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摘要
目的构建谷氨酸脱羧酶GAD65基因的杆状病毒重组供体质粒,包装重组GAD65的杆状病毒,感染昆虫细胞进行表达。方法先将已克隆的GAD65 cDNA与线性化的pFASTBACHTb进行连接,使pFASTBACHTb-GAD65与DH10BAC感受菌进行转座重组,利用抗性及蓝白斑筛选重组Bacmid/GAD65克隆,提取Bacmid/GAD65转染昆虫细胞Sf 9包装杆状病毒,利用病毒感染Sf9细胞进行蛋白表达,通过免疫荧光、SDS PAGE和Western blot检测表达情况。结果获得了重组GAD65的杆状病毒,细胞能表达出与GAD65单抗结合的蛋白,相对分子质量为65kDa左右,细胞可直接分...
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