阿魏酸调控AMPK通路对过氧化氢诱导的肠上皮屏障损伤的保护作用研究

作者：吴军城^*; 赵立国

来源：中华普通外科学文献(电子版), 2021, 15(05): 364-369.

• 阿魏酸
• 肠上皮屏障
• AMP激活蛋白激酶
• 紧密连接小带闭塞蛋白1
• 闭塞蛋白

目的观察阿魏酸(FA)对过氧化氢(H2O2)诱导的肠上皮屏障损伤保护作用,并初步探讨其作用机制。方法体外培养Caco-2细胞,建立肠上皮屏障模型,随机分为对照组、H2O2组、10 μmol/L FA组、20 μmol/L FA组、40 μmol/L FA组、单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂组、FA+AMPK抑制剂组。噻唑蓝(MTT)实验和乳酸脱氢酶(LDH)法检测Caco-2细胞存活和损伤情况;跨上皮电阻(TEER)测定各组评估肠上皮屏障功能变化;丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒检测各组肠上皮屏障氧化应激状态变化;Western blotting法检测各组肠上皮屏障闭塞蛋白(Occludin)、紧密连接小带闭塞蛋白1(ZO-1)和p-AMPK蛋白表达情况;免疫荧光法观察各组肠上皮屏障中Occludin和ZO-1蛋白分布及变化情况。结果与对照组相比,H2O2组Caco-2细胞存活率、TEER值、SOD活性、Occludin、ZO-1和p-AMPK蛋白表达显著降低(P<0.05),LDH活力、MDA表达显著升高(P<0.05);与H2O2组相比,10 μmol/L FA组、20 μmol/L FA组和40 μmol/L FA组Caco-2细胞存活率、TEER值、SOD活性、Occludin、ZO-1和p-AMPK蛋白表达依次升高(P<0.05),LDH活力、MDA表达依次降低(P<0.05),AMPK抑制剂组上述指标变化呈完全相反趋势。共聚焦显微镜观察显示,对照组ZO-1和Occludin蛋白沿细胞膜均匀分布,呈连续网状结构;H2O2组ZO-1和Occludin蛋白分布杂乱;AMPK抑制剂组蛋白分布进一步杂乱,结构破坏严重;40 μmol/L FA组ZO-1和Occludin蛋白分布趋于均匀;FA+AMPK抑制剂组ZO-1和Occludin蛋白分布连续性稍有恢复。结论 FA可能通过激活AMPK信号通路,发挥对肠上皮屏障功能的保护作用。