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摘要
目的开发微生物发酵生产舍雷肽酶的工艺,并了解基本酶学特性。方法从家蚕蛹的肠道中分离产酶菌株,单因素实验和响应面实验优化发酵培养基,采用(NH4)2SO4沉淀、超滤和DEAE离子交换层析3步纯化舍雷肽酶,电泳法测定酶的相对分子质量和等电点,考察pH和温度对酶活力和稳定性的影响,并测算酶的反应动力学常数。结果分离获得一株产舍雷肽酶的黏质沙雷氏菌LL-413菌株,摇瓶发酵产酶活力达到1 126 U·mL-1,10-L发酵罐中发酵产酶活性达到1 505 U·mL-1;舍雷肽酶相对分子质量和等电点分别约为52×103和7.2;酶活最适pH为8.0,在pH 5.0～10.0之间稳定;酶活最适温度为40℃,在45℃以下稳定。以酪蛋白为底物时,米氏常数(Km)和最大反应速度(Vmax)分别为22.3 mg·mL-1和1 355 mg·L·min-1。结论利用黏质沙雷氏菌LL-413菌株生产舍雷肽酶发酵单位高,酶的蛋白水解能力强、pH和热稳定性好,研究结果为该酶的生产和应用奠定了基础。
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