科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的探讨急性肝衰竭大鼠血清激活蛋白C(activated protein C,APC)的变化及其意义。方法本研究实验动物为健康普通级雄性6周龄Sprague-Dawley(SD)大鼠,体质量150～180 g。实验分为两部分,先将30只SD大鼠采用随机数字表法分为对照组、模型组及干预组,每组10只,观察各组大鼠一般状况,计算各组生存率。然后再将另外55只SD大鼠采用随机数据表法分为对照组(5只)、模型组(25只)和干预组(25只)。所有大鼠适应性饲养3 d,禁食12 h后,模型组和干预组大鼠腹腔注射D-氨基半乳糖(剂量为1000 mg/kg)和脂多糖(剂量为30μg/kg),建立急性肝衰竭大鼠模型,正常对照组腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液(5 ml/kg)。干预组于造模后10 min尾静脉注射10μg/ml的APC溶液(剂量为50μg/kg),模型组和对照组尾静脉注射等量0.9%氯化钠溶液(5 ml/kg)。模型组和干预组分别于造模后1 h、2 h、4 h、9 h、12 h腹腔注射10%水合氯醛(0.3 ml/100 g)麻醉处死,每个时间点处死5只。预实验提示对照组大鼠在等量生理盐水处理前后无明显变化,故于处理后统一时间点处死5只。检测各组大鼠不同时间点血清丙氨酸氨基转移酶(alanineaminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspertate aminotranferase,AST)、APC和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平。光学显微镜下观察各时间点大鼠肝组织病理学变化。采用Pearson相关性分析血清TNF-α与APC水平的相关性。结果大鼠肝组织HE染色示模型组和干预组大鼠肝细胞均出现坏死、出血和炎细胞浸润,并随时间加重,但同一时间点干预组大鼠肝细胞损伤较模型组轻。因前期预实验提示对照组大鼠各指标在处理前后无明显变化,根据动物实验"3R"原则中的减少原则,将对照组大鼠各指标的数据视为模型组和干预组大鼠的基线数据。模型组大鼠的生存率为20%(2/10),干预组大鼠的生存率为40%(4/10)。模型组和干预组基线[ALT:(45.6±7.1)U/L vs(45.6±7.1)U/L,AST:(107.8±27.2)U/L vs(107.8±27.2)U/L]、1 h [ALT:(48.2±5.9)U/L vs(47.4±6.2)U/L,AST:(141.0±44.8)U/L vs(134.0±34.9)U/L]和2 h [ALT:(59.8±10.5)U/L vs(53.6±9.6)U/L,AST:(144.0±39.7)U/L vs(163.2±33.4)U/L]血清ALT和AST水平差异无统计学意义(P均> 0.05),4 h [ALT:(546.6±287.9)U/L vs(310.0±153.5)U/L,AST:(1075.0±840.2)U/L vs(437.4±171.7)U/L]、9 h [ALT:(929.6±630.6)U/L vs(565.4±289.1)U/L,AST:(3078.0±2044.1)U/L vs(1003.2±452.5)U/L]和12 h [ALT:(528.6±221.6)U/L vs(306.0±146.2)U/L,AST:(1105.0±464.1)U/L vs(518.2±262.1)U/L] ALT和AST水平差异有统计学意义(P均<0.05),4 h、9 h和12 h干预组ALT和AST水平显著低于模型组(P均<0.05)。建模后1 h,模型组大鼠APC水平迅速下降至(32.242±2.649)ng/L,与其他时间点相比,差异有统计学意义(P均<0.05),建模后2 h进一步下降至(23.482±3.033)ng/L,此后APC维持在相对稳定水平[4 h:(24.340±3.367)ng/L,9 h:(19.992±3.238)ng/L,12 h:(22.100±3.950)ng/L]。建模后模型组所有时间点APC水平均低于基线[(99.015±11.543)ng/L],差异有统计学意义(P均<0.05)。干预组APC较模型组有升高趋势,干预组1 h[(61.137±6.088)ng/L]和12h[(27.743±2.623)ng/L] APC水平与模型组差异有统计学意义(P均<0.05)。建模后模型组和干预组大鼠血清TNF-α水平逐渐升高,均于9 h时达峰值[(177.190±78.473)ng/L、(170.475±75.353)ng/L]。干预组1 h [(24.177±5.037)ng/L vs(57.012±6.231)ng/L]、4 h[(27.455±6.698)ng/Lvs(79.533±5.651)ng/L]和12h[(53.785±11.501)ng/Lvs(89.295±4.188)ng/L] TNF-α水平显著低于模型组(P均<0.001)。模型组大鼠血清APC水平与TNF-α水平呈负相关(r=-0.5364,P=0.0013)。结论 APC可减轻急性肝衰竭大鼠的肝细胞损伤,对肝细胞有保护作用,其机制可能与APC能够抑制TNF-α水平有关。
-
单位西安交通大学第一附属医院
