建立人促甲状腺素受体α亚基HEK 293T细胞稳定表达株

作者：唐恭顺

来源：生物医学工程学杂志, 2014, 31(01): 146-151.

• 促甲状腺素受体
• 慢病毒
• 人胚肾细胞
• 甲亢

为研究抗甲状腺多肽的特异性与亲和力,本研究建立了人促甲状腺素受体(TSHR)α亚基(hTSHRA)稳定表达株。构建hTSHRA到慢病毒质粒GV218上形成GV218-hTSHRA,挑取GV218-hTSHRA构建物阳性大肠杆菌克隆,提取DNA测序结果与人TSHRA序列比对,100%吻合。结果显示:GV218-hTSHRA转染到HEK 293T后,Western blot显示,HEK 293T细胞提取蛋白出现52kD的hTSHRA目的条带。GV218-hTSHRA、辅助质粒在HEK 293T细胞中包装后,HEK 293T细胞表达绿色荧光蛋白。收取浓缩的包装病毒,qPCR测定滴度达到了2×108 TU/mL。再将包装病毒转染到HEK 293T细胞中,hTSHRA即表达在HEK 293T细胞上,细胞传代后hTSHRA仍然稳定表达。结果表明获得GV218-hTSHRA包装质粒,并建立了hTSHRA-HEK 293T稳定表达株,为研究抗甲状腺多肽与人TSHRα亚基特异性与亲和力提供了必要的实验材料。

• 单位
  四川大学华西医院