人胆固醇酯水解酶真核表达载体的构建及U937细胞系的转染

作者：顾立学; 罗俊生; 王瑞; 冯旭; 关宁; 霍晓川

来源：山东医药, 2011, (26): 14-16.

• 人胆固醇酯水解酶
• 真核表达载体
• 单核巨噬细胞
• U937细胞
• 转染 cholesterol ester hydrolase
• eukaryotic expression vector
• monocyte-macrophage cell line
• U937 cell
• transfection

目的构建人胆固醇酯水解酶(hCEH)绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-N1-hCEH,并观察其转染单核巨噬细胞株U937后,细胞中hCEH的表达情况。方法以人肝细胞L-O2总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增hCEH编码区序列,将扩增片段插入到pMD19-T载体中,回收、纯化目的片段后亚克隆到pEGFP-N1真核表达载体上,经双酶切、测序鉴定后,转染U937,观察U937中绿色荧光蛋白的表达情况。结果 RT-PCR扩增hCEH基因的编码区序列获得1条约1.7 kb的片段,与预期片段大小相符;以pEGFP-N1为载体,成功构建重组表达质粒pEGFP-N1-hCEH,该质粒可以在U937中表...

• 单位
  辽宁医学院附属第一医院