高通量筛选高产酪氨酸的酿酒酵母菌株

作者：刘堂浩; 李由然; 张梁; 丁重阳; 顾正华; 石贵阳; 徐沙^*

来源：生物工程学报, 2021, 37(09): 3348-3360.

DOI：10.13345/j.cjb.200754

• 酪氨酸
• 对香豆酸
• 甜菜黄素
• 高通量筛选

酪氨酸是重要的芳香族氨基酸,自身不仅具有重要的营养价值,也是合成香豆素类化合物和黄酮类化合物的重要前体。文中以实验室前期构建的一株解除了酪氨酸反馈抑制的酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae LTH0(ARO4K229L,ARO7G141S,Δaro10,Δzwf1,Δura3)为出发菌株,异源表达甜菜黄素合成基因DOD和CYP76AD1,使酿酒酵母产生黄色荧光。然后利用紫外诱变和常压室温等离子体(Atmospheric and room temperature plasma,ARTP)诱变相结合的方法对上述菌株进行随机诱变,并通过流式细胞仪筛选荧光强度显著提高的突变株。其中突变株LTH2-5-DOD-CYP76AD1在激发波长485 nm、发射波长505 nm处荧光强度为(5 941±435) AU/OD,比诱变前提高了8.37倍。对诱变后荧光强度提高较多的14株突变株进行发酵生产酪氨酸,胞外酪氨酸产量最高为26.8 mg/L,比出发菌株提高了3.96倍。进一步异源表达约翰逊黄杆菌Flavobacterium johnsoniae来源的酪氨酸解氨酶Fj TAL,对香豆酸产量达到119.8 mg/L,比出发菌株LTH0-FjTAL提高了1.02倍。

• 单位
  江南大学; 生物工程学院