人纤维蛋白原干热病毒灭活效果及灭活前后的质量变化

作者：谢来峰; 张学成; 罗坚; 张伦; 王海林; 马小伟^*

来源：中国生物制品学杂志, 2022, 35(10): 1205-1218.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003733

• 人纤维蛋白原
• 干热灭活
• 质量
• Sindbis病毒
• 脑心肌炎病毒

目的 评价人纤维蛋白原干热病毒灭活效果及灭活前后的质量变化。方法 取3批人纤维蛋白原样品，按样品与病毒9∶1的体积比分别加入Sindbis病毒和脑心肌炎病毒（encephalomyocarditis virus,EMCV），冻干后，于（99.5±0.5）℃下干热灭活30 min。96孔微量细胞病变法测定病毒滴度降低量，考察人纤维蛋白原干热灭活效果；并对干热前/后样品进行可见异物、稳定性、纯度、凝固活力、SDS-PAGE、高效液相分子排阻色谱（high performance liquid chromatography-size exclusion chromatography,HPLC-SEC）、圆二色光谱、荧光光谱、差示扫描荧光（differential scanning fluorimetry,DSF）分析，以评价其质量变化。结果 3批人纤维蛋白原样品干热30 min,Sindbis病毒滴度降低量分别为6.13、5.88、6.00 LgTCID50/0.1 mL,EMCV滴度降低量分别为≥4.94、≥4.68、≥5.00 LgTCID50/0.1 mL。3批人纤维蛋白原样品干热前/后，可见异物、稳定性试验均合格；SDS-PAGE分析可见相对分子质量约65 000、56 000和47 000的目的蛋白条带，未见裂解条带；纯度均值分别为（87.7±0.9）%和（87.7±1.5）%，活力均值分别为（18±0.8）和（18±0.5）s,HPLC纯度均值分别为（86.16±1.60）%和（86.36±0.67）%，最大荧光发射光谱均值分别为（341.9±0.2）和（342.1±0.2）nm，热转变中点温度1(mid point tem-perature of thermal transition 1,Tmid 1)均值分别为（47.84±0.09）和（47.36±0.36）℃，Tmid 2均值分别为（52.34±0.15）和（52.19±0.33）℃，差异均无统计学意义（P> 0.05）;α螺旋、β折叠、β转角、无规卷曲结构比例均值差异无统计学意义（P> 0.05）。结论 干热灭活可对人纤维蛋白原进行有效病毒灭活，灭活后质量未发生变化。

• 单位
  华兰生物工程股份有限公司; 中国科学院过程工程研究所