腭裂相关基因MCPR1在大肠杆菌中的融合表达及抗体制备

作者：轩东英; 金岩; 金明; 轩昆; 孙强; 胡世颉

来源：临床口腔医学杂志, 2004, (08): 469-472.

• MCPR1基因
• 原核表达
• 融合蛋白
• 多克隆抗体

目的 :MCPR1是我室利用消减杂交技术克隆出来的新基因 ,本研究利用融合蛋白制备MCPR1的多克隆抗体。方法 :采用多聚酶链式反应 (PCR)扩增出MCPR1基因蛋白编码序列 ,进一步将该基因片段克隆到中间载体pGEX -T -easy ,再酶切得到MCPR1片段定向克隆到 pGEX -4T -1载体中 ,构建融合表达载体pGEX -4T-MCPR1,在大肠杆菌中用IPTG进行诱导表达 ,得到GST -MCPR1融合蛋白 ,进行初步纯化及SDS -PAGE电泳 ,直接割胶 ,将其作为抗原免疫兔子。结果 :成功构建融合表达载体pGEX -4T -MCPR1,得到初步纯化的GST-MCPR1融合蛋白 ,免疫兔子 1个月后 ,获得免疫血清 ,初步纯化得到多克隆抗体。Western印迹分析表明所得到的抗体具有较强的特异性 ,ELISA分析证实其效价为 10 6。结论 :MCPR1多克隆抗体的获得性为在蛋白水平研究新MCPR1的功能提供了实验基础 ,后续实验可以利用免疫分析技术研究MCPR1蛋白与其它蛋白质的相互作用 ,从而为阐明MCPR1在胚胎发育及腭裂形成中所发挥的作用提供实验手段。

• 单位
  第四军医大学; 西京医院; 生物化学教研室