摘要
目的 观察黄芪、党参、龟板对人红系K562细胞γ珠蛋白mRNA表达及m6A甲基化的影响。方法 采用体外培养K562细胞株,分为黄芪党参龟板高(a)/低(b)剂量组(10、2.5 mg·mL-1)、黄芪党参高(c)/低(d)剂量组(10、2.5 mg·mL-1)、龟板高(e)/低(f)剂量组(10、2.5 mg·mL-1)、丁酸钠组(500μmol·L-1)及空白对照组,药物干预96 h。采用实时荧光定量PCR法检测K562细胞γ珠蛋白、METTL3、ALKBH5、FTO mRNA表达水平;比色法检测细胞m6A甲基化总体水平;Western Blot法检测细胞METTL3、FTO、ALKBH5蛋白表达水平。结果 与空白对照组比较,中药组(a、b、c、d、f组)K562细胞γ珠蛋白mRNA表达明显上调(P<0.05,P<0.01);中药组(a、b、c、f组)K562细胞m6A甲基化总体水平明显下降(P<0.05,P<0.01),丁酸钠组K562细胞m6A甲基化水平显著升高(P<0.01);各中药组K562细胞ALKBH5、FTO mRNA表达均明显上调(P<0.05,P<0.01),中药组(a、c、d、e组)K562细胞METTL3 mRNA表达明显上调(P<0.05);中药组(a、c组)K562细胞FTO蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论 中药黄芪、党参、龟板可能通过上调m6A去甲基化酶FTO的表达,进而下调红系K562细胞内的m6A甲基化水平;其诱导γ珠蛋白基因表达治疗儿童β地中海贫血的分子机制可能与调节m6A甲基化有关。
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