基于高通量测序技术探讨补骨脂宁治疗肺癌的潜在机制

作者：蔡硕; 陈思敏; 王媛媛; 刘华桢; 李芳; 张忠德

来源：中国实验方剂学杂志, 2021, 27(14): 183-192.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20210712

• 补骨脂宁
• A549
• 脂质代谢
• 高通量测序
• 肿瘤

目的:探索补骨脂宁治疗肺癌的潜在分子机制。方法:利用不同浓度的补骨脂宁干预A549细胞,采用噻唑蓝(MTT)法、高通量测序技术、趋势分析、基因本体(GO)功能注释和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析的方法分别检测A549细胞的增殖能力,筛选补骨脂宁抑制A549细胞增殖的关键基因以及关键通路,并利用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)对测序的结果进行验证,探讨补骨脂宁治疗肺癌的潜在机制。结果:补骨脂宁可明显抑制A549细胞的增殖,并调节细胞内4 364个基因的表达。通过趋势分析发现这些差异基因分别聚类在20个基因表达模式中,其中前4个基因表达模式具有统计学意义,且均为显著下调趋势,说明补骨脂宁主要通过抑制某些基因的表达,发挥抗增殖的作用;通过组间差异基因的比较,笔者发现随着补骨脂宁浓度的增加,下调基因也随之增加,细胞增殖趋势越加减弱,与趋势分析结果一致,因此,笔者着重分析高浓度补骨脂宁干预组的278个差异基因,GO分子功能结果显示,补骨脂宁主要改变细胞和代谢的过程,KEGG通路富集结果显示,补骨脂宁主要通过影响类固醇生物合成、脂肪酸代谢、不饱和脂肪酸的生物合成、酮体的合成与降解和类固醇激素的合成等通路发挥作用,因此选取显著富集于脂质代谢通路并且P<0.01的差异表达基因LSS,硬脂酰基辅酶A脱氢酶(SCD),3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合酶基因(HMGCS1),血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)进行验证,Real-time PCR显示补骨脂宁可以抑制LSS,SCD,HMGCS1的mRNA表达,升高ANGPTL4的mRNA表达,与测序结果基本一致。结论:补骨脂宁主要通过靶向脂质代谢途径相关的代谢因子,抑制A549细胞增殖,从而达到治疗肺癌的作用。

• 单位
  广东省中医院