A型产气荚膜梭菌KdpD/E双组份系统调节毒素基因表达的研究

作者：贺曦; 陈晓慧; 徐淑琴; 贺晓龙; 冶贵生^*

来源：中国病原生物学杂志, 2022, 17(06): 626-630.

DOI：10.13350/j.cjpb.220602

• A型产气荚膜梭菌
• 双组份系统
• a毒素基因
• cpe毒素基因

目的 明确kdpD基因编码的蛋白结构特点，探究A型产气荚膜梭菌中KdpD/E系统与alpha和cpe毒素基因表达趋势的关联性。方法 用试剂盒法提取A型Cp菌的基因组DNA,PCR扩增kdpD基因并测序，对该基因测序结果进行分析及蛋白结构预测；分别提取A型产气荚膜梭菌培养2-9 h 8个时间段的总RNA,采用电泳和核酸蛋白检测仪，测定各个时间段总RNA的浓度和纯度；将RNA反转录为cDNA,用实时荧光定量PCR检测kdpD、kdpE双组份系统与alpha、cpe毒素编码基因的相对表达量。结果 生物信息学预测KdpD蛋白结构中α-螺旋占76.1%,β-折叠占23.1%,β-转角占0.855%,无规则卷曲占0.427%,无跨膜区；提取总RNA的质量较高，其A260/A280值在1.8～2.1之间；实时荧光定量PCR检测kdpD、kdpE、alpha、cpe基因扩增产物溶解曲线单一，同时kdpD/E基因与alpha和cpe毒素基因表达趋势相似，即随着细菌的生长，信号基因和毒素基因的表达量均增加，且在3 h和4 h增幅明显，并在4 h时表达量最高，随后逐渐降低，其中alpha毒素基因表达量的变化更为明显。结论 产气荚膜梭菌kdpE基因的蛋白结构预测符合其作为应答调节蛋白的结构功能，A型Cp菌中KdpD/E双组份信号系统与alpha和cpe毒素基因的表达存在一定的相关性，alpha毒素作为A型产气荚膜梭菌产生的主要毒素与KdpD/E系统的相关性更显著。

• 单位
  青海大学农牧学院