利用Red重组系统敲除鲍曼不动杆菌asa A基因

作者：李磊; 王一诺; 邹清华^*

来源：微生物学免疫学进展, 2019, 47(01): 14-18.

DOI：10.13309/j.cnki.pmi.2019.01.003

• 鲍曼不动杆菌
• 基因敲除
• Ⅵ型分泌系统
• asaA

目的利用Red重组系统敲除鲍曼不动杆菌ATCC 17978的asaA。方法设计上下游引物中包含asaA的同源序列,并以pKD4质粒为模板,扩增含有卡那霉素抗性基因的DNA片段。将该片段转化于表达重组酶的17978感受态细胞中,在卡那霉素筛选压力下,得到经两次同源双交换的具有卡那霉素基因标记的突变菌株。随后,在重组酶的作用下将抗性基因去除,最终得到无抗性基因标记的突变菌株ΔasaA。结果通过该重组系统,首先将卡那霉素抗性基因的DNA片段替换了基因组中asaA的DNA片段,然后将卡那霉素抗性基因的DNA片段消除,最终获得了asaA缺失的突变体。结论通过Red重组系统为鲍曼不动杆菌中其他基因的缺失突变提供方法与思路。

• 单位
  北京大学; 基础医学院