体积排阻高效液相色谱法测定酸溶性Ⅰ型胶原蛋白含量的研究

作者：吴晓丽^*; 林红赛; 黄永富; 刘曦; 岳卫华

来源：北京生物医学工程, 2020, 39(02): 123-157.

• 酸溶性Ⅰ型胶原蛋白
• 胶原蛋白含量
• 体积排阻高效液相色谱法
• 磷酸钠缓冲液
• 优化

目的 建立酸溶性I型胶原蛋白含量测定的体积排阻高效液相色谱法（size-exclusion high-performance liquid chromatography,SE-HPLC）并进行方法确认，为快速、准确测定酸溶性I型胶原蛋白含量提供技术参考。方法 通过优化流动相组成、流速及柱温等因素来改善峰形，提高柱效，确定最佳检测条件，采用含DAD检测器的Agilent 1260高效液相色谱仪进行检测，检测波长为210 nm，外标法定量并进行方法学研究。结果 选择300 mmol/L磷酸钠-150 mmol/L氯化钠（pH=6.0）为流动相，设定流速为0.4 mL/min，柱温为20℃时，酸溶性I型胶原蛋白在体积排阻色谱柱Agilent Bio SEC-5(300?，4.6 mm×300 mm,5μm)(1?=0.1 nm）上的分离能获得最佳柱效。方法学研究结果表明，酸溶性I型胶原蛋白在1.5～120.0μg/mL范围内，与峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 9），定量限为0.6μg/mL。用建立的方法连续进样6次，检测供试品溶液的I型胶原蛋白含量，相对标准偏差（relative standard deviation,RSD）为1.1%；加标回收率为92.8%～101.3%。结论 该方法简便、快速，准确度、精密度和稳定性良好，可用于制备医疗器械产品的酸溶性I型胶原蛋白含量的测定。

• 单位
  北京市医疗器械检验所