科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的探讨滋阴清热复方、N-乙酰半胱氨酸(N-Acetyl-L-cysteine, NAC)与米托蒽醌甲磺酸盐(mitoquinone mesylate, mitoQ)对地塞米松所致MRL/lpr小鼠线粒体功能异常影响。方法 50只8周龄的MRL/lpr小鼠随机分为狼疮鼠组、地塞米松组、滋阴清热复方+地塞米松组、NAC+地塞米松组、mitoQ+地塞米松组, 每组10只;另选Balb/c小鼠为空白对照组, 共10只;分别于干预12周后, 取肾脏组织, 通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, qRT-PCR)与蛋白质印迹(Western-blot, WB)检测线粒体基因细胞色素C氧化酶亚基1(MT-CO1), 线粒体自噬基因PTEN诱导激酶1(PTEN-induced putative kinase 1, PINK1)、白细胞介素(interleukin, IL)-1β的mRNA及蛋白表达水平;比色法检测丙二醛(malondialdehyde, MDA)、超氧歧化酶(superoxide dismutase, SOD)表达差异。结果与正常鼠组相比, 狼疮鼠组肾脏线粒体呼吸链基因MT-CO1表达降低[qRT-PCR:(1.00+0.12)比(0.39±0.05);WB:(1.73±0.14)比(0.75±0.08), t值分别为9.61, 10.60, P值均<0.05]、线粒体复合物Ⅳ活性减弱[(9.37±0.32)比(7.12±0.26), t=9.53, P<0.05];SOD活性降低[(20.62±3.97)比(15.04±0.33), t=2.80, P<0.05], MDA含量升高[ (21.90±2.39)比(41.51±4.74), t=7.40,P<0.05];线粒体自噬基因PINK1表达升高[qRT-PCR:(0.99±0.17)比(1.42±0.05);WB:(0.80±0.06)比(1.37±0.07), t值分别为4.11, 10.57, P值均<0.05], 炎症因子IL-1β表达升高[qRT-PCR:(1.04±0.32)比(3.43±0.66);WB:(2.48±0.15)比(3.20±0.24), t值分别为6.48, 4.45, P值均<0.05], 差异具有统计学意义。与狼疮鼠组相比, 地塞米松组肾脏线粒体呼吸链基因MT-CO1表达[qRT-PCR: (0.39±0.05)比(0.19±0.05);WB:(0.75±0.08)比(0.36±0.08), t值分别为5.49, 5.79, P值均<0.05] 、线粒体复合物Ⅳ活性减弱[(7.12±0.26)比(5.83±0.39), t=5.56, P<0.05], SOD(U/mg)活性降低[(15.04±0.33)比(10.28±1.16), t=7.94,P<0.05]、MDA(μmol/mg)蛋白含量升高[(41.51±4.74)比(65.91±6.22), t=6.24, P<0.05];线粒体自噬基因PINK1表达升高[qRT-PCR: (1.42±0.05)比(1.87±0.04);WB:(1.37±0.07)比(1.74±0.14), t值分别11.95, 5.79, P值均<0.05], 炎症因子IL-1β表达降低[qRT-PCR: (3.43±0.66)比(1.27±0.37),P<0.05;WB:(3.20±0.24)比(1.31±0.31), t值分别为5.69, 8.36, P值均<0.05], 差异具有统计学意义。与地塞米松组比, 滋阴清热复方+地塞米松组、NAC+地塞米松组与mitoQ+地塞米松组表达肾脏线粒体呼吸链基因MT-CO1表达升高[qRT-PCR:(0.19±0.05)比(1.09±0.06)、(0.88±0.05)、(1.51±0.15), t值分别为22.45, 19.16, 16.93,P值均<0.05;WB:(0.36±0.08)比(1.28±0.05)、(1.09±0.06)、(1.67±0.10), t值分别为16.59, 12.41, 16.82,P值均<0.05], 线粒体复合物Ⅳ活性升高[ (5.83±0.39)比(9.05±0.64)、(8.58±0.10)、(10.80±0.67), t值分别为7.83, 9.63, 11.73, P值均<0.01], SOD活性升高[(10.28±1.16)比(22.98±0.61)、(21.47±0.88)、(37.48±1.35), t值分别为19.45, 15.45, 30.67, P值均<0.05]、MDA含量降低[(65.91±6.22)比(21.63±4.86)、(21.30±1.85)、(22.51±4.36), t值分别为11.22, 11.78, 11.43, P值均<0.05];线粒体自噬基因PINK1表达降低[qRT-PCR:(1.87±0.04)比(1.04±0.09)、(1.41±0.30)、(0.41±0.08), t值分别为16.40, 29.86, 2.93, P值均<0.05;WB:(1.74±0.14)比(1.03±0.10)、(0.83±0.11)、(0.99±0.05), t值分别为7.17, 8.90, 8.74, P值均<0.05], 差异具有统计学意义, 炎症因子IL-1β表达差异无统计学意义[qRT-PCR: (1.27±0.37)比(1.67±0.15)、(0.84±0.11)、(1.61±0.26), t值分别为2.04, 2.20, 1.52, P均>0.05;WB:(1.31±0.31)比(1.25±0.10)、(1.84±0.30)、(1.11±0.18), t值分别为0.31, 2.15, 0.98, P值均>0.05]。与NAC+地塞米松组相比, 滋阴清热复方+地塞米松组肾脏线粒体呼吸链基因表达MT-CO1表达升高, 差异具有统计学意义[qRT-PCR:(0.88±0.05)比(1.09±0.06);WB:(1.09±0.06)比(1.28±0.05), t值分别为5.31, 4.44, P值均<0.05];与mitoQ+地塞米松组相比, 滋阴清热复方+地塞米松组线粒体基因MTCO1表达下降[qRT-PCR:(1.51±0.15)比(1.09±0.06), WB:(1.67±0.10)比(1.28±0.05), t值分别为5.23, 5.91, P值均<0.05], SOD活性下降[(37.48±1.35)比(22.98±0.61), t=19.61,P<0.05], 差异具有统计学意义。结论滋阴清热复方可以减轻糖皮质激素所致的线粒体功能异常, 改善细胞和器官功能, 其机理可能通过抗氧化实现。
- 单位
