红色荧光蛋白核迁移蛋白shRNA干扰载体的构建

作者：廖霞; 庞实锋; 张强; 杨芳; 郑克勤; 周汝滨; 曹定国; 邹宇光

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2011, 27(07): 740-743.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.006057

• 融合基因
• RNA干扰
• shRNA

目的:利用红色荧光蛋白(RFP),建立一种直观、快速筛选有效RNA干扰片段的方法。方法:通过分子克隆技术将核迁移蛋白(NUDC)与RFP构建成融合基因,克隆至真核表达载体pDs中,以实现其融合表达;同时,将人U6启动子及9个NUDC的发夹结构分别克隆至上述同一真核载体中,构建成一系列针对NUDC不同干扰位点的RNA干扰载体,通过采用酶切及DNA序列鉴定,然后转染293T细胞,通过荧光显微镜观察293T细胞的荧光发光强度及荧光细胞数。结果:酶切及测序结果证实质粒为所需的序列;荧光显微镜观察结果显示,shNUDC-A的干扰效果最好。结论:成功构建了含RFP的NUDC真核shRNA干扰载体。

• 单位
  广东医科大学; 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司