青杄PwHAP5基因原核表达及多克隆抗体制备

作者：覃雪晶; 王雨涵; 曹一博; 张凌云^*

来源：生物技术通报, 2022, 38(08): 142-149.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2021-1404

• PwHAP5基因
• 原核表达
• 蛋白纯化
• 多克隆抗体

制备青杄(Picea wilsonii)PwHAP5基因的特异性多克隆抗体，为研究PwHAP5基因功能、分子机制奠定基础。经PCR扩增获得青杄花粉PwHAP5基因片段与载体pET-48b相连构建原核表达载体pET-48b-PwHAP5。经诱导产生重组蛋白PwHAP5，通过His-NTA镍柱纯化蛋白产物。蛋白经SDS-PAGE检测后再免疫兔子制备兔抗血清。血清经ProteinA纯化后，通过SDS-PAGE和Western blot检测抗体纯度和特异性。结果表明，成功构建了原核表达载体pET-48b-PwHAP5，制备了分子质量约为45 kD的重组蛋白PwHAP5。获得的青杄PwHAP5兔抗血清经间接ELISA法检测效价达1∶729 000以上；制备的PwHAP5蛋白兔多克隆抗体能特异性识别抗原，效价高，满足后续研究PwHAP5蛋白在青杄生长发育中的功能等需求。

• 单位
  北京林业大学