健脾化瘀方体外通过外泌体影响肝癌细胞的迁移、侵袭及上皮间质转化

作者：冯坤良; 陈清莲; 谢春凤; 钟崇

来源：中药新药与临床药理, 2021, 32(12): 1745-1751.

DOI：10.19378/j.issn.1003-9783.2021.12.002

• 健脾化瘀方
• 肝细胞癌
• 外泌体
• 上皮间质转化
• 迁移
• 侵袭

目的探讨健脾化瘀方（JHD）通过外泌体对肝癌细胞迁移、侵袭及上皮间质转化（EMT）的影响。方法利用转化生长因子β1（TGF-β1）刺激MHCC97H细胞,构建肝癌细胞EMT模型。根据处理条件,将细胞分为4组,（1）对照组:不进行干预;（2）模型组:TGF-β1(10 ng·mL-1);（3）JHD低浓度组:TGF-β1(10 ng·mL-1)+健脾化瘀方(2 mg·mL-1);（4）JHD高浓度组:TGF-β1(10 ng·mL-1)+健脾化瘀方(4 mg·mL-1)。干预48 h后,采用超速离心法提取各组细胞培养上清液的外泌体,通过透射电镜（TEM）、纳米颗粒追踪分析（NTA）、Western Blot法检测外泌体标志蛋白（CD63、CD81、HsP70、CD9）,以及外泌体内吞实验对外泌体进行鉴定。将提取的4组外泌体分别与MHCC97H细胞共培养24 h/48 h后,分离MHCC97H细胞,进行划细胞划痕实验、Transwell细胞侵袭实验及Western Blot法检测EMT相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin）。结果透射电镜下观察到外泌体的形态呈囊泡状,分布不一,有单个分布,也有聚集成组,背景清晰,无明显污染物,各组外泌体形态相近,无明显差异,直径在30～140 nm之间;纳米颗粒追踪分析仪检测到4组外泌体粒径的峰值在130～150 nm之间,与电镜观察结果基本一致;各组均可检测到外泌体标志蛋白CD63、CD81、HsP70、CD9表达。被PKH26标记的外泌体可被MHCC97H细胞重新吸收内化。与对照组比较,模型组的MHCC97H细胞迁移能力（24、48 h）及侵袭能力均显著增强（P<0.01）,E-cadherin蛋白表达显著下调（P<0.01）,Vimentin、N-cadherin蛋白表达显著上调（P<0.01）。与模型组比较,JHD高、低浓度组的MHCC97H细胞迁移能力（24、48 h）及侵袭能力显著减弱（P<0.01）,E-cadherin蛋白表达显著上调（P<0.01）,Vimentin、N-cadherin蛋白表达显著下调（P<0.01）。结论健脾化瘀方体外可通过外泌体抑制MHCC97H细胞的迁移、侵袭及上皮间质转化。

• 单位
  广州中医药大学; 广州中医药大学第一附属医院