过表达JMJD6基因的293T细胞系的构建及对水疱性口炎病毒增值效率的评价

作者：黄梦瑶; 杨帆; 杨洋; 邵文华; 王家丽; 吕岳芹; 赵晓义; 陈治彤; 曹伟军; 张伟^*; 郑海学^*

来源：中国兽医科学, 2023, 1-8.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2024.0068

• JMJD6
• 水疱性口炎病毒
• 慢病毒包装
• 过表达细胞系
• 干扰素

为提高水疱性口炎病毒（vesicular stomatitis virus， VSV）在细胞中的增殖效率，本研究利用慢病毒包装系统构建Jumonji C结构域蛋白6（Jumonji domain-containing protein 6，JMJD6）过表达的HEK-293T/JMJD6细胞系，分析VSV在HEK-293T/JMJD6细胞系与HEK-293T细胞中的复制差异。首先以JMJD6基因为目标，构建重组质粒pLV-puro-3 × Flag-JMJD6，并与辅助质粒pMD2.G和psPAX2共转染至HEK-293T细胞进行慢病毒包装。将包装好的慢病毒感染HEK-293T细胞并通过嘌呤霉素筛选获得过表达JMJD6基因的阳性细胞。利用Western-blot、间接免疫荧光试验、流式细胞术和蚀斑试验检测VSV在HEK-293T/JMJD6细胞系中的复制能力。结果显示，在HEK-293T/JMJD6细胞系中，VSV的复制能力显著增强。实时荧光定量检测VSV感染的HEK-293T/JMJD6细胞系和野生型HEK-293T细胞中干扰素下游基因的表达，结果显示HEK-293T/JMJD6细胞系抑制VSV诱导的Ⅰ型干扰素下游基因的产生。总之，本研究构建的HEK-293T/JMJD6细胞系能显著促进VSV的增殖并抑制Ⅰ型干扰素信号通路，为VSV疫苗候选细胞株的筛选奠定了基础。

• 单位
  兰州大学; 中国农业科学院兰州兽医研究所