重复水高压注射介导hHGF表达载体在小鼠体内的持续高效表达

作者：朱传龙; 李毓雯; 高人焘; 李宜; 聂青和

来源：实用肝脏病杂志, 2009, (02): 81-83+123.

• 促肝细胞生长因子
• 肝脏
• 水高压注射
• 基因表达
• 小鼠

目的构建hHGF表达载体并通过水高压注射法研究hHGF在小鼠体内的持续表达。方法从慢性乙型肝炎患者肝组织提取总RNA,RT-PCR扩增出hHGF基因的cDNA片段,将目的片断克隆至pMD18-T载体,酶切和测序鉴定,然后将目的片断酶切回收后插入pcDNA3.1质粒,构建真核表达载体pcDNA-hHGF,通过重复水高压注射法将pcDNA-hHGF导入小鼠肝脏,并在首次水高压注射后第0、3、6、9、12、15、18和21天分别收集小鼠血清和肝组织,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测hHGF在小鼠体内的表达情况。结果扩增出了长约2187bp的基因片段,并将其克隆至pMD18-T载体,酶切和测序鉴定无误;将pMD-hHGF中hHGF基因亚克隆至pcDNA3.0载体,酶切鉴定无误;首次水高压注射后不同时间检测外周血和肝脏均有hHGF的高水平表达。结论成功构建了hHGF真核表达载体pCMV-hHGF,重复水高压注射法可将该基因导入小鼠肝脏并获得持续高效的表达。

• 单位
  安徽省立医院; 安徽医科大学; 第四军医大学