核酸内切酶Surveyor酶切法快速检测MTB对吡嗪酰胺耐药性方法的建立及评估

作者：胡严杰; 龚世伟; 任易^*

来源：中国防痨杂志, 2021, 43(08): 813-816.

• Surveyor酶
• 分枝杆菌,结核
• 抗药性
• 吡嗪酰胺

目的建立应用核酸内切酶Surveyor酶切法快速检测MTB对吡嗪酰胺(pyrazinamide,PZA)耐药性的方法,并对其临床价值进行评估。方法选取来自武汉市肺科医院的耐多药(MDR)MTB菌株91株作为研究对象。分别以上游引物∶下游引物为2∶5的比例扩增所有菌株,同时以上游引物∶下游引物为5∶2的比例扩增结核分枝杆菌标准株H37Rv,然后将PCR产物以1∶1的比例混合杂交,应用核酸内切酶Surveyor酶切反应产物后进行电泳。以杂交条带能够被核酸内切酶Surveyor酶切割作为判定pncA基因及其启动子序列存在基因突变的依据。以BACTEC MGIT 960检测MTB对PZA耐药性方法和MTB的pncA基因及其启动子区基因序列测定法作为对照,评价核酸内切酶Surveyor酶切法的应用价值。结果以BACTEC MGIT 960法检测PZA耐药性作为对照,核酸内切酶Surveyor酶切法检测PZA耐药的敏感度为100.0%(29/29),特异度为87.1%(54/62),准确度为91.2%(83/91)。以MTB的pncA基因及其启动子区的基因测序结果作为对照,核酸内切酶Surveyor酶切法检测MTB对PZA耐药的敏感度为100.0%(37/37),特异度为100.0%(54/54),准确度为100.0%(91/91)。结论核酸内切酶Surveyor酶切法检测pncA基因及其启动子区突变的性能与基因测序高度一致,可以为没有基因测序条件的地区检测MTB对PZA耐药性提供一种新的思路。

• 单位
  武汉市肺科医院