血浆外泌体源性miR-20a-5p通过靶向PIK3R1影响雌激素受体阳性乳腺癌细胞骨转移

作者：都婧^*; 杨蕙; 刘雪

来源：中华内分泌外科杂志, 2022, 16(04).

• miR-20a-5p
• 雌激素受体
• 乳腺癌
• PIK3R1
• 外泌体

目的探讨血浆外泌体源性miR-20a-5p通过靶向PIK3R1对雌激素受体阳性的乳腺癌(estrogen receptor-positive breast cancer, ER(+)BC)骨转移的影响。方法借助生物信息学网站检索与ER(+)BC骨转移相关的数据集, 选择miR-20a-5p纳入研究。收集90例ER(+)BC患者与相对应的健康人的血浆, 检测血浆中PIK3R1的表达, 从血浆中提取外泌体, 检测外泌体中miR-20a-5p的表达。双荧光素酶报告实验验证miR-20a-5p与PIK3R1的靶向调控关系。分别将转染NC-inhibitor、miR-inhibitor的外泌体或转染si-NC、si-PIK3R1的ER(+)BC细胞注射到小鼠左心室, Micro-CT扫描骨组织并进行骨组织TRAP染色。将转染NC-inhibitor、miR-inhibitor的外泌体与转染si-NC、si-PIK3R1的ER(+)BC细胞共培养后, 使用Western blot检测破骨细胞分子c-fos、NFATc1的表达。结果 qRT-PCR检测发现较正常血浆外泌体(1±0.26)或细胞(1±0.13), miR-20a-5p在ER(+)BC血浆外泌体(1.49±0.27)(t=12.40, P<0.001)及BC细胞系MCF-7(1.64±0.13)(t=6.03, P=0.004)、BT474(1.49±0.11)(t=4.98, P=0.008)、T47D(1.98±0.15)(t=8.55, P=0.001)中均表达升高。而与正常血浆外泌体(1±0.25)或细胞(1±0.10)比较, PIK3R1在ER(+)BC血浆外泌体(0.69±0.24)(t=8.48, P<0.001)及ER(+)BC细胞系MCF-7(0.73±0.05)(t=4.18, P=0.014)、BT474(0.61±0.05)(t=6.04, P=0.004)、T47D(0.34±0.04)(t=10.61, P<0.001)中则表达降低。PIK3R1在血浆(t=8.48, P<0.001)及ER(+)BC细胞系MCF-7(t=4.18, P=0.014)、BT474(t=6.04, P=0.004)、T47D(t=10.61, P<0.001)中则表达降低。PIK3R1被证实为miR-20a-5p的靶基因。与NC-inhibitor组小鼠相比, miR-inhibitor组小鼠的骨小梁组织体积(t=3.32, P=0.029)、骨小梁区域体积(t=6.24, P=0.003)、骨体积分数(t=7.35, P=0.002)和骨矿物密度(t=13.72, P<0.001)均增加, 成熟破骨细胞数量减少。与NC-inhibitor组比较, miR-inhibitor组细胞中c-fos(t=9.04, P=0.001)和NFATc1(t=13.42, P<0.001)的表达减少。与miR-inhibitor+si-NC组相比, miR-inhibitor+si-PIK3R1组中小鼠的骨小梁组织体积(t=3.03, P=0.039)、骨小梁区域体积(t=6.37, P=0.003)、骨体积分数(t=3.36, P=0.028)和骨矿物密度(t=6.92, P=0.002)均减少, 成熟破骨细胞数量增加, 细胞中c-fos(t=7.75, P=0.002)和NFATc1(t=9.65, P=0.001)的表达增加。结论 ER(+)BC患者血浆外泌体源性miR-20a-5p通过抑制PIK3R1表达来促进ER(+)BC骨转移。

• 单位
  烟台市烟台山医院; 烟台毓璜顶医院