猪Cabyr基因克隆与表达特征研究

作者：王宵燕; 陈子璇; 宋成义

来源：扬州大学学报（农业与生命科学版）, 2018, 39(03): 1-8.

DOI：10.16872/j.cnki.1671-4652.2018.03.001

• 猪
• Cabyr基因
• 克隆
• 表达

为克隆猪钙结合酪氨酸磷酸化调节蛋白(Cabyr)基因及研究该基因的表达特征和规律,采用RT-PCR克隆猪Cabyr基因cDNA 3种剪接体的全序列,并对所获的序列进行生物信息学分析;以β-Actin为内参,PCR检测Cabyr 3种剪接体在成年梅山猪公母猪的组织表达特征;qRT-PCR检测3种剪接体在不同日龄(2、30、60、90、150日龄)段猪睾丸中的表达规律;构建Cabyr1的真核表达载体,纯化质粒并免疫小鼠,分离鼠抗猪的多克隆抗血清。采用间接免疫荧光法观察Cabyr1编码氨基酸在成熟精子中的定位。结果表明:Cabyr在梅山猪睾丸中共有3种剪接体,其中Cabyr1和Cabyr2编码433个氨基酸,Cabyr3编码382个氨基酸,在2个氨基酸的N端存在RIIα功能域。Cabyr的3种剪接体均非睾丸特异性表达基因,包括所有剪接体的引物序列在所检测的组织中均有表达。在不同日龄的睾丸中表达规律相同,60日龄开始出现表达,随日龄的上升,剪接体Cabyr2表达量低于Cabyr1和Cabyr3。Cabyr1基因编码氨基酸定位于细胞质,在整个精子表面均可见荧光。推测Cabyr的功能不仅参与精子的结构组成,而且其N端的RIIα功能域与AKAP结合,行使钙离子和蛋白酪氨酸激酶信号转导通路,参与精子能量供应和获能。

• 单位
  扬州大学