摘要
目的探讨人T淋巴细胞白血病1型病毒(human T-cell leukemia virus 1,HTLV-1)Tax蛋白对人高迁移率族蛋白1(high mobility group box 1,HMGB1)基因转录调控的影响。方法提取TaxN和TaxP细胞总RNA和蛋白质,通过real-time PCR和Western blot分析HMGB1 mRNA和蛋白质的表达情况;利用脂质体介导方法 ,将6个含有不同长度HMGB1调控序列的pGL3-HMGB1-luc瞬时转染至TaxN和TaxP细胞,观察HMGB1基因在不同T细胞中的转录活性;pCMV-Tax与pGL3-HMGB1-luc瞬时共转染至Jurkat细胞,观察Tax蛋白对HMGB1基因的转录调控影响;染色体免疫共沉淀(ChIP)找寻Tax蛋白影响HMGB1基因转录调控的区段。结果 TaxP细胞中HMGB1 mRNA和蛋白质表达水平高于TaxN细胞。TaxN和TaxP细胞中HMGB1调控趋势基本相似,均表现出3号质粒(pHLuc3,含有-504~+83 HMGB1区段)的相对荧光素酶活性(HMGB1/neo)最高,但是6号质粒(含有-1163~+83 HMGB1区段)却表现出TaxP细胞HMGB1的转录活性明显高于TaxN细胞。pCMV-Tax与pGL3-HMGB1-Luc报告基因共转染到Jurkat细胞也显示,6号质粒(pHLuc6)中Tax促进HMGB1基因的转录。ChIP分析证实了Tax蛋白可能富集在HMGB1的-1163~-1043区段。结论 -504~-383可能是HMGB1基因转录激活的关键启动子区,Tax蛋白可能富集在HMGB1的-1163~-1043区段促进HMGB1基因转录。
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