4种分子伴侣促进猫细小病毒样颗粒可溶性表达的研究

作者：夏霖亚; 吴铭洁; 王蕾; 张宁; 罗国良; 吴丛梅; 殷玉和^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2021, (07): 19-153.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2020.07.0226

• 猫细小病毒
• 病毒样颗粒
• 分子伴侣
• VP2蛋白
• 原核表达
• 可溶性表达

为了研究4种分子伴侣在E.coli表达系统中对猫细小病毒(feline Parvovirus, FPV)VP2蛋白表达及其组装的病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs)活性的影响,试验构建重组质粒pET30a-VP2,将重组质粒pET30a-VP2分别与4种分子伴侣pKJE7、pKJE8、pGro7和pTf16转化至E.coli ER2566感受态细胞中进行共表达,运用SDS-PAGE、Western-blot对表达产物进行检测,通过硫酸铵沉淀结合疏水层析柱对表达产物进行纯化,电镜观察VLPs的形态,并采用血凝试验检测其免疫活性。结果表明:重组质粒pET30a-VP2在E.coli表达系统中主要以包涵体形式表达蛋白。4种分子伴侣与重组质粒pET30a-VP2共表达,加入终浓度为2 mg/mL L-阿拉伯糖及0.1 mmol/L IPTG或5 ng/mL四环素的诱导剂,25℃诱导16 h,均能显著提高FPV VP2蛋白的可溶性表达,表达蛋白具有抗原特异性。纯化得到的FPV VP2蛋白在250 mmol/L NaCl(pH值为8.0)条件下可自组装形成均一、直径约为24 nm的VLPs。仅分子伴侣pTf16与重组质粒pET30a-VP2共表达获得的FPV VP2蛋白经透析形成的FPV VLPs正常,无碎片,其血凝效价为219。说明通过将重组质粒pET30a-VP2分别与4种分子伴侣在E.coli表达系统中共表达,4种分子伴侣均可促进FPV VP2蛋白的可溶性表达,成功纯化并获得FPV VLPs。

• 单位
  中国农业科学院特产研究所; 长春工业大学; 生命科学学院