重组原核表达载体pGEX-4T-1-eIF5A的构建及表达

作者：邱伟; 李向云; 王晓慧; 徐祥; 黄宏; 徐云升

来源：中国皮肤性病学杂志, 2012, (11): 983-986.

• 真核起始因子5A
• 质粒
• 融合蛋白 Eukaryotic initiation factor 5A
• Plasmid
• Fusion protein

目的构建人eIF5A基因的融合表达载体并在大肠杆菌中诱导表达pGEX-4T-1-eIF5A融合蛋白。方法以pCMV6-XL4-eIF5A作为模板,经PCR技术扩增目的片段,将获得的目的片段重组到原核表达载体pGEX-4T-1上,经酶切鉴定、DNA测序检测插入序列的正确性。将测序正确的重组表达质粒pGEX-4T-1-eIF5A转化到E.coliBL21内,经IPTG诱导后,GSTpull-down后SDS-PAGE电泳分析以及Western blot检测人eIF5A的表达。结果成功构建重组表达质粒pGEX-4T-1-eIF5A,经DNA测序证实插入序列与设计完全一致,GSTpull-down后电...

• 单位
  中国人民解放军陆军军医大学; 温州医科大学