鹅星状病毒刺突蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

作者：卢清侠; 李伟; 金前跃; 郭振华; 冯丽丽; 邢云瑞; 柴书军; 邢广旭; 张改平^*

来源：江苏农业科学, 2022, 50(22): 159-165.

DOI：10.15889/j.issn.1002-1302.2022.22.023

• 鹅星状病毒
• 刺突蛋白
• 单克隆抗体
• 抗原表位

为了制备鹅星状病毒(goose astrovirus, GAstV)刺突(Spike)蛋白的单克隆抗体，并对获得的单克隆抗体的生物学特性进行鉴定，将大肠杆菌表达的截短Spike蛋白免疫BALB/c小鼠，经细胞融合和单克隆抗体的筛选来获得阳性杂交瘤细胞，并进一步利用免疫印迹和间接免疫荧光技术进行单抗的鉴定；采用ELISA技术进行单克隆抗体亚型、抗体效价的测定；同时根据GAstV XX株Spike蛋白序列合成重叠的多肽库进行单抗识别的抗原表位鉴定。共获得3株阳性杂交瘤细胞，分别命名为1A5、2B4、12E6;免疫印迹和间接免疫荧光实验显示3株单克隆抗体均与Spike蛋白具有良好的免疫反应，其中2B4、12E6可与GAstV发生反应；亚型鉴定结果显示单抗12E6、2B4为IgG2b亚类，单抗1A5为IgG2a亚类；轻链均为κ链；敏感性结果显示，抗体效价都在1∶51 200以上；抗原表位的鉴定结果表明单抗1A5识别的抗原表位为(EP16)ELRNRLNIADGDYVI,单抗2B4识别的抗原表位为(EP21)AGDSNPGETFQNFKM。本研究成功制备了针对GAstV Spike蛋白的单克隆抗体，并鉴定出2个新的抗原表位，为建立快速、简便的GAstV检测方法奠定了基础。

• 单位
  河南省农业科学院农业经济与信息研究所; 河南农业大学; 生命科学学院; 河南省农业科学院