红丽海棠茎尖超低温保存技术研究

作者：彭颖; 陈友锋; 乔谦; 刘燕^*

来源：福建农业学报, 2023, 38(05): 566-573.

DOI：10.19303/j.issn.1008-0384.2023.05.008

• 观赏海棠
• 茎尖超低温保存
• 抗氧化剂
• 细胞程序性死亡

【目的】建立红丽海棠超低温保存技术体系，实现其种质资源保存。【方法】以红丽海棠茎尖为试材，研究蔗糖预处理浓度和时间、装载处理时间、PVS2处理时间对其超低温保存后的存活率的影响，并在此基础上，在超低温保存程序中的不同环节添加3种抗氧化剂[过氧化氢酶(Catalase,CAT)、抗坏血酸(Ascorbic acid,AsA)和谷胱甘肽(Glutathione,GSH)]和2种细胞程序性死亡(PCD)抑制剂[(乙烯利Ethephon,Eth)和NO供体(Sodium Nitroprusside,SNP)]，探讨其对茎尖冻后存活率的影响。【结果】(1)红丽海棠茎尖的玻璃化保存程序为：首先将红丽组培苗切为4～5 mm带顶芽茎段，接种在含0.7 mol·L-1蔗糖的预培养基后放入4℃冰箱冷锻炼2 d；再将其切成约1.5～2.0 mm的茎尖，置于Loading溶液中，在室温下处理20 min，随后于0℃下PVS2溶液处理90 min，立即投入液氮冻存；需用时将其从液氮罐取出后，快速放入38℃水浴中化冻1 min，再用Unloading溶液在室温下震荡洗涤2次，每次10 min。采用此方法红丽海棠茎尖液氮冻后存活率为66.58%，恢复生长率为16.67%。(2)不同浓度的外源添加剂对红丽海棠冻后存活率影响不同。其中，CAT、AsA和GSH最佳添加浓度分别为200 U·ml-1、400μmol·L-1和0.04μmol·L-1，较对照冻后存活率分别提高了20.28%、6.75%和27.61%，添加Eth和SNP没有显示明显的正向作用。【结论】红丽海棠茎尖可以实现超低温保存，外源添加适宜浓度GSH、CAT、AsA可以提高液氮冻存后率，效果最好的GSH可将恢复生长率从16.67%提高到41.39%。

• 单位
  国家花卉工程技术研究中心