pcDNA3.1-CD74-ROS1重组质粒构建与表达对肺癌细胞增殖及迁移的影响

作者：吴亚州; 李佳; 张蕾

来源：肿瘤防治研究, 2018, 45(04): 199-204.

• CD74-ROS1
• 融合PCR
• 非小细胞肺癌
• 迁移
• 增殖

目的构建C-ros致癌基因1(ROS1)融合基因CD74-ROS1重组质粒,并转染A549细胞株,检测其对肺癌细胞迁移能力的影响。方法通过PCR技术获得CD74和ROS1基因片段,利用融合PCR法构建CD74-ROS1融合基因,构建pc DNA3.1-CD74-ROS1重组质粒,通过脂质体转染技术转入A549细胞中,利用Real-time PCR和Western blot技术检测CD74-ROS1的表达。MTT法观察细胞增殖情况,结晶紫染色法观察细胞形态变化,划痕实验检测CD74-ROS1对肺癌细胞迁移能力的影响。结果酶切及测序结果表明CD74-ROS1融合基因构建成功,阳性克隆的CD74-ROS1蛋白表达显著增加。CD74-ROS1过表达导致细胞增殖能力增强,细胞形态上发生上皮-间质样转变且细胞迁移能力增强。结论pc DNA3.1-CD74-ROS1重组质粒构建成功,并在A549细胞中稳定表达,CD74-ROS1过表达能够促进肺癌细胞增殖、形态转变且增强其迁移能力。

• 单位
  基础医学院; 锦州医科大学