酵母双杂交技术筛选α干扰素结合蛋白的基因

作者：曲建慧; 成军; 张玲霞; 钟彦伟; 杨媛; 郭江; 张黎颖; 刘妍; 王琳; 戴久增; 徐东平

来源：中华传染病杂志, 2006, (04): 235-238.

• 干扰素&alpha
• 酵母菌
• 双杂交系统技术
• 克隆
• 分子
• 基因 Interferon alpha
• Yeasts
• Two hybrid system techniques
• Cloning
• molecular
• Genes

目的筛选人肝细胞cDNA文库中与α干扰素(IFNα)蛋白具有相互作用的蛋白基因。方法用聚合酶链反应(PCR)扩增IFNα基因,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转染酵母细胞AH109,Western blot证明IFNα蛋白能够在AH109中表达。然后将AH109与转染了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性菌落,提取质粒后转化DH5α大肠埃希菌并经氨苄西林抗性筛选,提取单克隆菌落质粒,酶切鉴定正确者进行测序,再行生物信息学分析。结果成功克隆化IFNα基因并在酵母细胞中表达,应用酵母双杂交筛选...

• 单位
  解放军第302医院