红色荧光蛋白与卵白蛋白表位融合蛋白的表达与纯化

作者：刘娜; 万瑛; 周镜然; 邹丽云; 支轶; 郭晟; 吴玉章

来源：免疫学杂志, 2005, (05): 382-385.

• 红色荧光蛋白
• 抗原递呈
• 蛋白表达

目的构建红色荧光蛋白(dsRed)与卵白蛋白(Ovalbumin,OVA)表位融合蛋白的高效表达质粒,并表达与纯化此红荧光蛋白标记的OVA模式抗原。方法合成的寡聚核甘酸变性退火成双链DNA接头,此接头含有OVA257-264表位的编码序列和一个AgeⅠ酶切位点,然后将其与dsRed蛋白编码序列克隆连接进pET16b,此表达质粒(pET-16bOR)转化大肠杆菌BL21,异丙基硫代半糖苷诱导表达后,流式细胞术和激光共聚焦显微镜检测融合蛋白的表达,并进一步经Ni2+-NTA琼脂糖柱纯化,SDS-PAGE和Westernblot分析纯化的融合蛋白。结果成功构建dsRed与OVA表位融合蛋白的高效表达质粒pET-16bOR,此融合蛋白能被488nm和568nm激发荧光,此蛋白被纯化并经SDS-PAGE和Westernblot分析证实。结论红荧光蛋白与OVA表位的融合蛋白具有荧光特性,并在大肠杆菌表达、纯化,可作为进一步分析抗原递呈的模式抗原。

• 单位
  第三军医大学