猪源肠外致病性大肠杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立

作者：程家园; 李亮; 邢刚; 刘雪兰; 孙裴; 魏建忠; 李郁^*

来源：养猪, 2022, (02): 89-94.

DOI：10.13257/j.cnki.21-1104/s.2022.02.013

• 猪源ExPEC
• 全菌体蛋白
• 间接ELISA
• 抗体检测

利用制备的猪源肠外致病性大肠杆菌(ExPEC)全菌体蛋白建立一种检测猪源ExPEC抗体的间接ELISA方法。将2株猪源ExPEC SDjie18-10(O38)、HByan18-2(O127)超声裂解的全菌体蛋白作为包被抗原，对反应条件进行优化，建立检测猪源ExPEC抗体的间接ELISA方法，并进行临床应用与评价。该方法的最佳条件：包被抗原浓度为15μg/m L,37℃1 h+4℃过夜；2%BSA于37℃封闭2 h；血清稀释度为1∶800,37℃孵育30 min；酶标二抗稀释度为1∶5 000,37℃作用30 min；显色时间为37℃15 min。该方法可特异性检测猪源ExPEC抗体，阳性血清稀释至1∶6 400仍可检出，与其他猪病原阳性血清均无交叉反应，批内及批间变异系数均小于10%。应用间接ELISA与MAT进行符合性比较及临床猪血清样品感染抗体的同步检测，两种方法的符合率分别为93.33%和94.50%且无显著性差异(P>0.05)，具有较高的均一性，同时间接ELISA的感染抗体阳性检出率(19.00%)略高于MAT(17.50%)，两者检测结果高度一致(K=0.816)。基于猪源ExPEC全菌体蛋白建立的猪源ExPEC抗体间接ELISA检测方法，具有良好的特异性、敏感性和重复性以及临床应用的可靠性，可用于猪源ExPEC的免疫监测和流行病学调查。

• 单位
  安徽农业大学; 动物科技学院