H7N9流感病毒NA基因5’UTR可变区A27G突变可增强NA基因转录与翻译

作者：唐秀娟; 王昕; 彭博; 武伟华; 刘慧; 孙颖; 房师松^*

来源：国际病毒学杂志, 2019, 26(06): 365-369.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1673-4092.2019.06.002

• H7N9流感病毒
• eGFP
• N9-UTR
• RNA聚合酶I报告系统

目的 探讨H7N9流感病毒神经氨酸酶(neuraminidase, NA)基因非翻译区(untranslated region, UTR)可变区碱基多态性对NA基因转录与翻译的影响。方法 通过生物信息学方法分析H7N9流感病毒NA基因UTR的可变区碱基多态性位点,人工合成N9-UTR可变区随机突变文库。利用自主构建的RNA聚合酶I eGFP报告系统,构建N9-3’UTR-eGFP-5’UTR RNA聚合酶I随机突变荧光报告文库。从N9-UTR突变荧光报告文库中随机挑选克隆转染H1N1流感病毒辅助感染的MDCK细胞,荧光显微镜观察eGFP的荧光表达,同时用多功能酶标仪定量检测eGFP的相对荧光强度；利用β-actin作为内参,采用实时荧光RT-PCR定量检测eGFP基因的转录变化。测序鉴定eGFP上调或下调的N9-UTR克隆并分析导致eGFP表达变化的UTR可变区SNP特征。结果 随机筛选了6个N9-UTR可变区随机突变荧光报告克隆,发现N9-2克隆的eGFP下调,而N9-7克隆eGFP上调。测序分析发现突变核苷酸位点位于5’UTR的27位,eGFP上调表现为A27G。结论 H7N9流感病毒NA基因的5’UTR可变区A27G突变可增强NA基因转录与翻译。

• 单位
  深圳市疾病预防控制中心