RT-PCR构建人甲胎蛋白全长基因真核表达载体

作者：贾军; 任军; 李峰; 李立文; 郭晓彤; 斯晓明

来源：现代肿瘤医学, 2005, (01): 34-36.

• 甲胎蛋白
• 基因RT-PCR
• 载体 alpha fetoprotein
• gene
• RT-PCR
• vector

目的　采用反转录PCR(RT-PCR)构建人甲胎蛋白 (Alpha-Fetoprotein, AFP)全长基因真核表达载体,为下一步应用以AFP蛋白为靶点的基因治疗作准备。方法　体外培养人肝癌细胞HepG2,Trizol裂解细胞,提取总mRNA。设计含有特定酶切位点BglⅡ,SalⅠ和真核启动元件Kozak序列的RT-PCT正反向引物,采用RT-PCR法克隆AFP全长cDNA,使用BglⅡ +SalⅠ双酶切载体pEGFP-C3载体和AFPcDNA,将AFPcDNA连接载体pEGFP-C3,构建新的真核表达载体,命名为pEGFP-AFP。结果　通过测序证明pEGFP-AFP真核表达载体含有AFP...

• 单位
  第四军医大学; 西京医院; 北京大学