两启动子影响egfp在绿僵菌中的荧光表达

作者：刘少芳; 王苗苗; 涂雄兵; 张雄鹏; 农向群^*; 曹广春; 王广君; 张泽华

来源：中国农业科学, 2015, S1: 23-31.

• egfp
• 启动子RP27
• 启动子PgpdA
• 金龟子绿僵菌
• 遗传转化

【目的】通过研究高效组成型三磷酸甘油醛脱氢酶基因启动子PgpdA和稻瘟病菌核糖体蛋白基因启动子RP27对绿色荧光蛋白基因egfp在绿僵菌转化子中表达的影响,为构建具有稳定报告基因的绿僵菌工程菌株提供高表达启动子,并为研究绿僵菌侵染寄主过程及宿存扩散提供依据。【方法】构建含潮霉素B抗性基因hph为标记基因、egfp为报告基因、分别以RP27和PgpdA为启动子的PAN-r-egfp和PAN-p-egfp表达载体。采用CaCl2-PEG介导方法转化金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)菌株Ma9。以激光共聚焦显微镜观察转化子菌丝和分生孢子的荧光强度。【结果】在PAN-r-egfp和PAN-p-egfp转化的hph抗性转化子中,分别有40%和31%实现了egfp在绿僵菌的高强表达。以RP27启动的转化子菌丝和分生孢子均能表达强烈荧光,以PgpdA启动的转化子只有菌丝可观察到较强荧光,但分生孢子无荧光或荧光极弱。【结论】绿色荧光蛋白基因egfp的表达受启动子和绿僵菌生长发育的影响。RP27启动的表达不受金龟子绿僵菌Ma9生长阶段的影响,在菌丝和分生孢子阶段均可启动egfp表达。而PgpdA的启动作用在分生孢子阶段可能受到抑制,不能启动egfp的表达。

• 单位
  植物病虫害生物学国家重点实验室; 中国农业科学院植物保护研究所