高分辨率HLA-DRB基因型分析方法的研究

作者：袁建林; 薛丽; 白玉杰; 赵锦荣; 杨芳; 武**; 王禾; 张运涛; 张波; 李欣

来源：中华泌尿外科杂志, 2005, (11): 20-23.

• HLA抗原
• 焦磷酸微测序
• 基因型
• 器官移植

目的采用焦磷酸微测序技术,建立一种高通量、高分辨率的HLADRB基因型分析新方法,为临床应用提供依据。方法对HLADRB外显子2DNA序列进行同源性分析,设计PCR引物,提取健康人外周血淋巴细胞基因组DNA,PCR扩增外显子2基因片段,克隆构建含有外显子2的重组质粒pMD/DRB302023。扩增产物经链亲和素包被磁珠纯化、变性、分离制备单链DNA测序模板,采用PSQ96焦磷酸测序仪进行实时测序,分析判断HLADRB基因型。结果扩增并克隆了HLADRB外显子2,焦磷酸微测序结果与克隆质粒常规测序结果比较,测序正确,与HLA数据库基因序列比较,可准确进行HLADRB基因型分析。采用重组质粒pMD/DRB302023和pMD/DRB10405等比例混合模拟杂合子基因型,焦磷酸微测序分析获得预期结果。结论焦磷酸微测序技术应用于HLADRB基因型分析具有高分辨率和快速等优点,可有效分析杂合子基因型,该新方法有望应用于器官及骨髓移植的供体/受体筛查。

• 单位
  西京医院; 中国人民解放军空军军医大学