PKC及缝隙连接蛋白Cx43改变在吗啡和舒芬太尼预处理缺氧复氧损伤心肌中的作用

作者：高小茹; 张冬梅; 王萌; 宋华丽

来源：中国医院药学杂志, 2017, 37(16): 1570-1575.

DOI：10.13286/j.cnki.chinhosppharmacyj.2017.16.06

• PKC
• 阿片药物
• 缺氧/复氧损伤
• Cx43

目的:探讨蛋白激酶C(PKC)信号通路及心肌缝隙连接蛋白Cx43改变在阿片药物预处理中的作用。方法:原代心肌细胞分离培养。将培养5 d的心肌细胞分成8组。正常对照组(C组)不给予任何处理,建立培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型(I/R组),吗啡组(MF组)加入吗啡至终浓度0.3μmol·L-1,舒芬太尼组(SF组)加入舒芬太尼至终浓度0.000 3μmol·L-1,PKC激动剂PMA+吗啡组(PMA+MF组)加入PMA至终浓度0.02μmol·L-1,再进行吗啡预处理;PKC抑制剂Rottlerin+吗啡组(ROT+MF组)加入Rottlerin至终浓度5μmol·L-1,再进行吗啡预处理;PKC激动剂PMA+舒芬太尼组(PMA+SF组)加入PMA至终浓度0.02μmol·L-1,再进行舒芬太尼预处理;PKC抑制剂Rottlerin+舒芬太尼组(ROT+SF组)加入Rottlerin至终浓度5μmol·L-1,再进行舒芬太尼预处理。各组做上述相应处理后取材检测细胞存活率。免疫荧光共聚焦技术检测缝隙连接蛋白Connexin 43(Cx43)的平均光密度(AOD),用Western-blot检测细胞Cx43总蛋白及其磷酸化水平(P-Cx43)的表达量。结果:与C组比较,其余各组心肌细胞存活率、Cx43 AOD值、心肌细胞Cx43总蛋白表达及P-Cx43表达降低(P<0.05);与I/R组比较,MF组、SF组、ROT+MF组、ROT+SF组、PMA+MF组、PMA+SF组心肌细胞存活率、Cx43 AOD值、Cx43总蛋白和P-Cx43表达增高(P<0.05);与MF组比较,ROT+MF组心肌细胞存活率、Cx43 AOD值、Cx43总蛋白及P-Cx43表达降低(P<0.05),SF组心肌细胞存活率、Cx43 AOD值和Cx43总蛋白降低(P<0.05),而P-Cx43表达增高(P<0.05),PMA+MF组心肌细胞存活率、Cx43 AOD值、Cx43总蛋白和P-Cx43表达均增高(P<0.05);ROT+SF组较SF组心肌细胞Cx43 AOD值、Cx43总蛋白和P-Cx43表达低(P<0.05),而PMA+SF组较SF组心肌细胞存活率、心肌细胞Cx43 AOD值、Cx43总蛋白和P-Cx43表达高(P<0.05)。结论:吗啡和舒芬太尼预处理可减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤,且吗啡对心肌细胞的保护作用较舒芬太尼强,这种心肌细胞保护作用可能与PKC信号通路的激活有关。

• 单位
  北京市海淀区妇幼保健院; 宁夏医科大学; 宁夏医科大学总医院