猪呼吸道病原菌多重PCR检测方法的建立及应用

作者：吴艳; 黎娜铭; 张宇鑫; 张伟; 陈穗莲; 黄云; 田永宽; 曾智勇; 吴学祥^*; 王彬^*

来源：动物医学进展, 2023, 44(12): 82-87.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2023.12.005

• 猪
• 呼吸道
• 病原菌
• 多重聚合酶链反应

为建立一种快速诊断由猪链球菌(SS)、猪胸膜肺炎放线杆菌(App)、猪多杀性巴氏杆菌(Pm)、副猪嗜血杆菌(Hps)、猪支气管败血波氏杆菌(Bb)和猪肺炎支原体(Mhp)单独或混合感染引起的猪呼吸道疾病的检测方法，基于上述6种病原菌对应的gdh(SS)、apxⅣA(App)、KMT1(Pm)、16S rRNA(Hps)、fla(Bb)和p36 ldh(Mhp)基因设计特异性引物，通过优化各反应条件建立了能同时检测SS、App、Pm、Hps、Bb和Mhp的多重PCR方法。结果显示，该方法特异性强，仅对SS、App、Pm、Hps、Bb和Mhp有特异性扩增，对大肠埃希氏菌、奇异变形杆菌、停乳链球菌和金黄色葡萄球菌等其他病原菌的扩增结果均为阴性；敏感性较高，对6种病原菌DNA的最低检出限分别为SS 8.66×102拷贝/μL、App 1.05×104拷贝/μL、Pm 8.61×102拷贝/μL、Hps 9.01×102拷贝/μL、Bb 7.54×102拷贝/μL、Mhp 3.86×103拷贝/μL。利用该多重PCR和各单项PCR分别检测贵州省9个市(州)部分猪场的469份临床样品，结果显示，多重PCR阳性检出率为App 0.85%(4/469)、Pm 15.35%(72/469)、SS 59.49%(279/469)、Hps 52.67%(247/469)、Mhp 6.40%(30/469)、Bb 5.12%(24/469)。混合感染主要以SS和Hps为主，阳性检出率为30.92%(145/469),其次是Pm、SS和Hps混合感染，阳性检出率为7.04%(33/469),其他混合感染情况占比较低。多重PCR和单项PCR的总阳性符合率为96.76%。结果表明，建立的多重PCR检测方法为SS、App、Pm、Hps、Bb和Mhp混合感染的临床快速检测及流行病学调查提供了技术支持。

• 单位
  动物科学学院; 贵州大学