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摘要
目的：观察三石汤对P2X7R/PKR信号通路介导的巨噬细胞NLRP3炎症小体活化的影响，从而明确三石汤治疗痛风性关节炎的分子机制。方法：将THP-1巨噬细胞分为空白组、模型组、三石汤低剂量、中剂量、高剂量和抑制剂组。除空白组外，其余各组用尿酸单钠结晶诱导构建痛风性关节炎细胞模型。采用流式细胞术检测各组巨噬细胞ROS水平，以ELISA法检测各组MDA含量及SOD和GSH-PX的活性，以Western blot检测P2X7R/PKR信号通路和NLRP3炎症小体相关蛋白的表达。在此基础上，构建巨噬细胞与滑膜细胞共培养体系，用CCK8和流式细胞术分别检测滑膜细胞的活性及凋亡水平。结果：与空白组相比，模型组巨噬细胞ROS水平、MDA的含量、SOD和GSH-PX的活性显著增加，NLRP3、Mature IL-1β、Pro IL-1β、Mature IL-18、Pro IL-18、Mature Caspase-1、GSDMD-NT、P2X7R和p-PKR蛋白的表达水平显著上调，GSDMD-FL蛋白的表达显著下调，差异均具有统计学意义（P<0.05和P<0.01）。与模型组比较，三石汤能够降低巨噬细胞ROS水平、MDA的含量、SOD和GSH-PX的活性，下调巨噬细胞NLRP3、Mature IL-1β、Pro IL-1β、Mature IL-18、Pro IL-18、Mature Caspase-1、GSDMD-NT、P2X7R和p-PKR蛋白的表达，上调GSDMD-FL蛋白的表达，差异均具有统计学意义（P<0.05和P<0.01）。此外，与空白组相对比，模型组中滑膜细胞的活性降低，其凋亡的水平上升，组间比较差异均具有统计学意义（P<0.05）。而与模型组相对比，三石汤能够显著地增加滑膜细胞的活性，抑制细胞的凋亡水平，各组间比较差异均具有统计学意义（P<0.05和P<0.01）。结论：三石汤能够通过抑制P2X7R/PKR信号通路的激活从而降低NLRP3活化水平，达到治疗痛风性关节炎的作用。
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