重组腺病毒Ad5F35-SD-EGFP的构建及其对K562细胞增殖的影响

作者：史静; 胡晶; 肖青; 彭智; 曹唯希; 罗秋平; 王方; 冯文莉

来源：南方医科大学学报, 2011, (11): 1806-1811.

• Bcr-Abl
• SH2
• DED
• 重组腺病毒
• AD293细胞 Bcr-Abl
• SH2
• DED
• recombinant adenovirus
• AD293 cellS

目的构建表达SH2-DED融合基因的新型重组腺病毒Ad5F35-SD-EGFP,观察其对K562细胞增殖的抑制作用。方法重叠PCR扩增SH2-DED融合基因并克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建成穿梭质粒pAdT-SD-EGFP并进行酶切和测序鉴定。穿梭质粒经Pme I酶切后转化pAd5F35-GFP的BJ5183感受态,通过细菌内同源重组产生重组腺病毒质粒pAd5F35-SD-EGFP及其突变体,Pac I酶切后转染AD293细胞进行包装。重组腺病毒Ad5F35-SD-EGFP经PCR和western blot鉴定后进行病毒扩增和滴度测定。体外感染K562细胞,通过MTT和流...

• 单位
  重庆医科大学; 重庆医科大学附属第一医院