miR-34a调控Notch-1/NF-κB信号通路对脓毒症小鼠脑功能的保护作用

作者：葛赟; 黄曼; 颜成敏; 陈芬; 马岳峰

来源：中华急诊医学杂志, 2017, 26(01): 76-81.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2017.01.015

• miR-34a
• Notch-1
• NF-κB
• 慢病毒载体
• 小鼠

目的观察脓毒症小鼠脑组织TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10及其Notch-1、NF-κB mRNA及其蛋白表达的动态变化,通过构建miR-34a过表达慢病毒载体及包装,并进行鞘内注射,研究其调控Notch-1/NF-κB信号通路对脓毒症小鼠脑组织各指标的影响。方法将清洁级小鼠54只随机(随机数字法)分为假手术组(sham组,n=9,仅行腹腔开关术),模型组(CLP组,n=15,采用盲肠结扎穿孔模型),阴性对照组[NC组,n=15,鞘内注射阴性对照慢病毒(滴度为5×108 TU/mL)5μL/d,共3d,第7天行CLP术],干预组[n=15,鞘内注射miR-34a慢病毒(滴度为5×108 TU/mL)5μL共3d,第7天行CLP术],各组小鼠均于术后24 h,麻醉后处死,留取脑组织标本。观察小鼠行为学变化,术后24 h进行神经功能评分;用ELISA法分别测定脑组织TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10的水平;用实时荧光定量-PCR(real-time fluorogenic quantitativePCR)法测定脑组织Notch-1、NF-κB mRNA表达;用Western Blot法测定脑组织Notch-1、NF-κB蛋白表达;并观察脑组织病理学改变。结果与sham组比较,CLP组在术后24 h点神经功能评分、TNF-α、IL-6水平、NF-κB mRNA及其蛋白表达(P<0.01)、IL-1β显著升高(P<0.05),IL-10水平、Notch-1 mRNA及其蛋白表达显著下降(P<0.01),NC组在术后24h点神经功能评分、TNF-α、IL-1β水平、NF-κB蛋白表达(P<0.01)、IL-6水平显著升高(P<0.05),TL-10水平、Notch-1 mRNA及其蛋白表达显著下降(P<0.01),NF-κB mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);与CLP组比较,干预组在术后24 h点TNF-α水平(P<0.01)、NF-κB mRNA(P<0.05)及其蛋白表达(P<0.01)显著下降,神经功能评分、IL-1β、IL-6水平差异无统计学意义(P>0.05),IL-10、Notch-1 mRNA(P<0.05)及其蛋白表达(P<0.01)显著升高,NC组各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。光镜下见CLP术后24 h脑组织损伤,干预组脑损伤有所减轻。结论 miR-34a调控Notch-1/NF-κB信号通路对脓毒症小鼠脑功能有一定保护作用。

• 单位
  浙江大学医学院附属第二医院