4-羟基他莫昔芬依赖的内含肽调控绿色荧光蛋白功能研究

作者：赵拯浩; 王步森; 王玉东; 朱丹妮; 董铭心; 侯利华^*; 陈薇^*

来源：生物技术通讯, 2019, 30(05): 619-623.

• 内含肽
• 4-羟基他莫昔芬
• 小分子依赖
• 绿色荧光蛋白

目的:验证小分子4-羟基他莫昔芬(4-HT)依赖的内含肽调控绿色荧光蛋白(e GFP)功能的可行性。方法:根据e GFP的结构与功能,在蛋白上选取7个氨基酸位点,通过同源重组方式将内含肽序列插入不同位点,转染293T细胞系后通过流式细胞术检测e GFP的表达情况,分析4-HT依赖的内含肽调控剪接效率。结果:在选取的7个氨基酸位点中,有5个具有调控效果,其中S148位点的4-HT调控效果最好,4-HT的最适工作浓度为4μmol/L。结论:在e GFP蛋白上发现一个新的高效的4-HT调控的内含肽剪接位点S148,与已报道位点R109相比,剪接效率提高8倍。