小鼠TSR2-3/TSP-1基因片段的克隆及其GST融合蛋白的表达和纯化

作者：王欣; 刘彤; 陈莹; 陈杰

来源：中国医科大学学报, 2006, 35(5): 454-457.

DOI：10.3969/j.issn.0258-4646.2006.05.003

• TSP2-3基因
• 克隆
• 表达
• 纯化

目的:获取小鼠TSR2-3/TSP-1基因片段,并高效表达和纯化GST-TSR2-3融合蛋白.方法:应用RT-PCR技术,从小鼠肺总RNA中,获得编码TSR2-3的基因片功能片段,测序后,通过酶切克隆至表达载体pGEX-5X-2,构建重组表达载体,并导入E.coli BL21宿主菌中,IPTG诱导表达重组的GST融合蛋白,亲和层析纯化表达产物,SDS-PAGE和Western blot进行分析鉴定.结果:获得小鼠TSR2-3基因片段,测序结果与GenBank的基因序列一致,重组GST融合蛋白经SDS-PAGE和Western blot分析,在相对分子量39 kDa处,出现特异性蛋白条带,重组蛋白经GST亲和层析柱纯化后,得到了高纯度的融合蛋白.结论:成功克隆小鼠TSR2-3基因片段,并在E.coli BL21中高效表达,亲和层析后获得高纯度GST-TSR2-3融合蛋白.

• 单位
  公共卫生学院; 中国医科大学; 基础医学院