应用抑制性消减杂交技术筛选XTP3的反式激活基因

作者：王春花成军闫惠平闫杰石英程胜禹

来源：解放军医学杂志, 2005, (02): 127-129.

• 抑制性消减杂交
• 克隆
• XTP3
• 反式激活 suppression subtractive hybridization
• clone
• XTP3 protein
• transactivation

目的　应用抑制性消减杂交技术构建乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP3的差异表达的cDNA消减文库 ,克隆XTP3反式激活相关基因。方法　以XTP3表达质粒pcDNA3 1(- ) XTP3转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 1(- )为对照 ;制备转染后的细胞裂解液 ,提取mRNA并逆转录为cDNA ,经RsaⅠ酶切后 ,将实验组cDNA分成两组 ,分别与两种不同的接头衔接 ,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR ,将产物与T/A载体连接 ,构建cDNA消减文库 ,并转染大肠杆菌进行文库扩增 ,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果　文库扩增后得到 30...

• 单位
  北京地坛医院; 首都医科大学附属北京佑安医院