附子多糖对深低温冻存血管保存效果的影响研究

作者：钟郁佳; 史业弘; 王成^*

来源：环球中医药, 2023, 16(01): 39-45.

• 深低温冻存
• 附子多糖
• 冷冻保护剂
• 血管
• 线粒体凋亡通路
• 凋亡

目的 观察不同浓度附子多糖(fuzi-polysaccharides, FPS)对深低温冻存大鼠血管组织的保护作用，并探讨其对线粒体凋亡通路相关因子的调控机制。方法 将36只SPF级雄性SD大鼠随机分成6组，对照组、冻存模型组、FPS 0.1 mg/mL组、FPS 1 mg/mL组、FPS 10 mg/mL组和FPS 20 mg/mL组，每组6只。取大鼠腹主动脉后，冻存模型组使用灭菌注射用水，FPS浓度组分别用含不同浓度FPS作冷冻保护剂(0.1 mg/mL、1 mg/mL、10 mg/mL、20 mg/mL),均经程序降温后放入-196℃液氮内保存1周。采用苏木精—伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色法进行病理切片观察血管组织形态变化；蛋白免疫印迹法(western blot, WB)检测B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein, Bax)、细胞色素c(cytochrome c, Cyt-c)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(cysteine-dependent aspartate-specifc proteases-9,Caspase-9)蛋白表达。实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测Bcl-2、Bax mRNA表达。对照组取材后直接进行上述指标的检测。结果 (1)HE染色结果显示：与对照组相比，冻存模型组血管组织结构损伤严重；从FPS浓度1 mg/mL起，FPS组血管组织病理变化较冻存模型组改善，内膜连续性开始增强，中膜层纤维组织排列相对紧密，外膜可见；其中，FPS 10 mg/mL组、FPS 20 mg/mL组血管组织结构保存相对完整。(2)WB结果显示：与对照组相比，冻存模型组Bax、Cyt-c、Caspase-9蛋白表达水平均显著增加(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与冻存模型组相比，FPS可以显著下调Bax、Cyt-c、Caspase-9蛋白表达(P<0.05),上调Bcl-2蛋白表达(P<0.05),且FPS 10 mg/mL组、FPS 20 mg/mL组效果更显著，但两者之间差异无统计学意义(P>0.05)。(3)qRT-PCR结果显示：与对照组比较，冻存模型组Bcl-2 mRNA表达水平明显降低(P<0.05),Bax mRNA表达水平明显增加(P<0.05);与冻存模型组比较，FPS 10 mg/mL组可以显著上调Bcl-2 mRNA表达水平、下调Bax mRNA表达水平(P<0.05)。结论 FPS可能通过抑制线粒体信号通路的转导，上调Bcl-2表达，下调Bax表达，减少Cyt-c释放从而抑制Caspase-9激活，起到对深低温冻存血管组织的保护作用，其中当FPS浓度为10 mg/mL时效果最佳。

• 单位
  遵义医科大学第五附属（珠海）医院