骨桥蛋白表达水平对多房棘球蚴原头节生长发育的影响

作者：卓怡呈; 杨海成; 刘程豪; 张宝财; 多小勇; 张示杰^*

来源：中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(03): 299-305.

• 多房棘球绦虫
• 骨桥蛋白
• 原头节
• 生长发育

目的 探讨骨桥蛋白(OPN)表达水平对多房棘球蚴原头节生长发育的影响。方法 从感染多房棘球蚴的长爪沙鼠体内分离原头节，体外培养3 d后，分为沉默EmOPN (LV-EmOPN-734)组、沉默对照(LV3-NC)组、过表达EmOPN (LV-EmOPN-0423)组、过表达对照(LV5-NC)组等4组，每组设置3个平行孔，每孔含原头节约5 000个。LV-EmOPN-734组中加入LV-EmOPN-734慢病毒稀释液(终浓度为1.4×107 TU/ml)、LV-EmOPN-0423组中加入LV-EmOPN-0423慢病毒稀释液(终浓度为4.83×108拷贝/ml)，相应对照组加入等量的慢病毒稀释液(空质粒)。感染后72 h，荧光显微镜下观察各组原头节的荧光强度，蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测原头节中OPN的相对表达量，半胱天冬氨酸蛋白酶-3 (Caspase-3)检测试剂盒检测原头节Caspase-3活性，EdU细胞成像试剂盒检测原头节增殖能力。感染后72 h，将原头节与大鼠肝癌细胞共培养8～12周，扫描电镜下观察多房棘球蚴囊泡生发层的显微结构。采用t检验对组间差异进行统计学分析。结果 慢病毒感染原头节后72 h，荧光显微镜下可见慢病毒侵入原头节内，呈环状或点状分布。Western blotting结果显示，LV-EmOPN-734组EmOPN相对表达量为0.43±0.04，低于LV3-NC组的0.80±0.07 (t=8.623,P<0.01);LV-EmOPN-0423组EmOPN相对表达量为1.18±0.21，高于LV5-NC组的0.73±0.06 (t=3.333,P<0.05)。Caspase-3活性检测结果显示，LV-EmOPN-734组Caspase-3活性为(61.55±1.64)μmol/L，高于LV3-NC组的(28.20±2.16)μmol/L (t=24.57,P<0.01);LV-EmOPN-0423组Caspase-3活性为(50.11±6.45)μmol/L，低于LV5-NC组的(78.22±16.43)μmol/L (t=3.185,P<0.05)。EdU细胞成像试剂盒检测结果显示，LV-EmOPN-734组EdU+原头节数/总原头节数为0.47±0.06，低于LV3-NC组的0.72±0.10 (t=3.663,P<0.05);LV-EmOPN-0423组EdU+原头节数/总原头节数为0.81±0.09，高于LV5-NC组的0.54±0.06 (t=4.309,P<0.05)。扫描电镜观察结果显示，LV-EmOPN-734组囊泡生发层细胞出现塌陷、皱缩、脱落，失去正常结构；LV-EmOPN-0423组囊泡生发层细胞膜完整，形态饱满，形成生发小囊并长出小蒂与生发层相接。结论 OPN表达水平的升高/降低可促进/抑制多房棘球蚴原头节的生长发育。

• 单位
  石河子大学医学院第一附属医院; 石河子大学