人血小板基因220C>T和429＋4insg变异真核表达载体的构建及表达

作者：徐秀章; 丁浩强; 刘静; 夏文杰; 邓晶; 陈扬凯; 王嘉励; 邵媛; 陈大伟; 叶欣^*

来源：中华医学遗传学杂志, 2019, 36(02): 124-127.

• 血小板
• CD36基因
• 变异
• 真核表达载体

目的构建人血小板CD36基因220C>T和429+4insg变异的真核表达载体,并转染HEK293T细胞进行CD36蛋白的表达分析。方法提取人血小板总RNA并逆转录为cDNA,经PCR扩增获得分别携带220C>T和429+4insg基因变异的CD36基因片段;经TA克隆将目的基因片段连接到pcDNA3.1/V5-His-TOPO载体并转化TOP10E.coli,蓝白斑筛选获得阳性质粒,提取质粒DNA进行测序分析;将分别含有220C>T和429+4insg基因变异体的质粒DNA在effectene作用下转染HEK293T细胞;应用流式细胞术及Western印迹分别对220C>T和429+4insg基因变异体的CD36蛋白表达进行鉴定分析。结果通过TA克隆成功构建了pcDNA3.1/V5-His-CD36 (220C>T/429+4insg)真核表达载体,转染HEK293T细胞后,经流式细胞术和Western印迹分析,证实220C>T和429+4insg基因变异可导致CD36蛋白在HEK293T细胞的缺失表达。结论 CD36基因220C>T和429+4insg变异均可引起人血小板CD36的缺失表达,明确了220C>T和429+4insg变异对CD36表达的影响,为其他CD36基因变异的研究奠定了基础。

• 单位
  广州血液中心